液相色譜儀的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。與經(jīng)典的液相色譜相比,具有液相所用的固定相粒度小(5um-10um)、傳質(zhì)快、柱效高的優(yōu)勢(shì)。近年來(lái),在保健食品功效成分、營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑、維生素類、蛋白質(zhì)的分離測(cè)定等應(yīng)用廣泛。世界上約有80%的有機(jī)化合物可以用HPLC來(lái)分析測(cè)定。
液相色譜的分離過(guò)程 HPLC,借溶質(zhì)在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分離。
液相色譜儀操作步驟:
1)過(guò)濾流動(dòng)相,根據(jù)需要選擇不同的濾膜。
2)對(duì)抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。
3)打開(kāi)HPLC工作站(包括計(jì)算機(jī)軟件和色譜儀),連接好流動(dòng)相管道,連接檢測(cè)系統(tǒng)。
4)進(jìn)入HPLC控制界面主菜單,manual,進(jìn)入手動(dòng)菜單。
5)一段時(shí)間沒(méi)用,或者換了新的流動(dòng)相,需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵,直接在泵的出水口,用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥,需要在manual菜單下,先purge,再start,沖洗時(shí)速度不要超過(guò)10ml/min。
6)調(diào)節(jié)流量,初次使用新的流動(dòng)相,可以先試一下壓力,流速越大,壓力越大,一般不要超過(guò)2000。injure,選用合適的流速,on,走基線,觀察基線的情況。
7)設(shè)計(jì)走樣方法。file,選取selectusersandmethods,可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個(gè)新的方法,newmethod。選取需要的配件,包括進(jìn)樣閥,泵,檢測(cè)器等,根據(jù)需要而不同。選完后,protocol。一個(gè)完整的走樣方法需要包括:a.進(jìn)樣前的穩(wěn)流,一般2-5分鐘;b.基線歸零;c.進(jìn)樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換;d.走樣時(shí)間,隨不同的樣品而不同。
8)進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣方法,start。進(jìn)樣,所有的樣品均需過(guò)濾。方法走完后,postrun,可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)記等。全部樣品走完后,再用上面的方法走一段基線,洗掉剩余物。
9)關(guān)機(jī)時(shí),先關(guān)計(jì)算機(jī),再關(guān)液相色譜。
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